大鼠ELISA試劑盒的底物
HRP催化過(guò)氧化物的氧化反應(yīng)，代表性的過(guò)氧化物為H2O2，其反應(yīng)式如下：
DH2+ H2O2 D+ H2O
上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。在ELISA中，DH2一般為無(wú)色化合物，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物，以便作比色測(cè)定。常用的供氫體有鄰苯二胺（O-phenylenediamine,OPD）、四甲基聯(lián)苯胺（3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB）和ABTS[2,2-azino-di-（3-ethylbenziazobine sulfonate-6）]。
OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后，在492nm處有zui高吸收峰，靈敏度高，比色方便，是HRP結(jié)合物zui常用的底物。OPD本身難溶于水，OPD·2HCL為水溶性。曾有報(bào)導(dǎo)OPD有致異變性，操作時(shí)應(yīng)予留意。OPD見(jiàn)光易變質(zhì)，與過(guò)氧化氫混合成底物運(yùn)用液后更不安穩(wěn)，須現(xiàn)裝備現(xiàn)用。在試劑盒中，OPD和H2O2一般分成二組分，OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式，片劑中含有發(fā)泡助溶劑，運(yùn)用更為方便。過(guò)氧化氫則配入底物緩沖液中，有制成易保存的濃縮液，運(yùn)用時(shí)用蒸餾水稀釋。先進(jìn)的ELISA試劑盒中則直接配成含保護(hù)劑的工作濃度為0.02% H2O2的運(yùn)用液,只需參加OPD后即可作為底物運(yùn)用液。