誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法

在體外培養(yǎng)條件下，動(dòng)物細(xì)胞會(huì)自發(fā)融合，但是頻率極低。因此，一般都需要添加具有誘導(dǎo)細(xì)胞融合效應(yīng)的生物或化學(xué)藥劑，或者采用電融合技術(shù)，人為地促進(jìn)細(xì)胞融合。

病毒誘導(dǎo)融合 

病毒是zui早采用的融合劑。常用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的病毒有仙臺(tái)病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺(tái)病毒zui常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活，使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。用滅活的仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合，融合率較高，對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞都適宜，且仙臺(tái)病毒能在雞胚中大量繁殖，容易培養(yǎng)；但是仙臺(tái)病毒不穩(wěn)定，在保存過(guò)程中融合活性會(huì)降低，并且制備過(guò)程比較煩瑣。此外，病毒引進(jìn)細(xì)胞后，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生命活動(dòng)產(chǎn)生干擾。

聚乙二醇PEG誘導(dǎo)融合 

聚乙二醇PEG具有強(qiáng)烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用，能夠有效地促進(jìn)植物原生質(zhì)體和動(dòng)物細(xì)胞的融合。在不同種類(lèi)的動(dòng)物細(xì)胞混合液中加入聚乙二醇，就會(huì)發(fā)生細(xì)胞凝集作用；在稀釋和除去聚乙二醇的過(guò)程中，就會(huì)發(fā)生細(xì)胞融合。聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合的機(jī)理，目前還不太清楚。聚乙二醇是化學(xué)試劑，使用起來(lái)很方便，誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率比較高，但是它有一定毒性，對(duì)有些細(xì)胞（如卵細(xì)胞）不適用。

電融合

 20世紀(jì)80年代建立起來(lái)的電融合技術(shù)，是將兩種細(xì)胞的混合液置于低壓交流電場(chǎng)中，使細(xì)胞聚集成串珠狀，然后施加高壓電脈沖，以促使細(xì)胞融合。緊密排列的細(xì)胞，在相互接觸的細(xì)胞膜之間會(huì)出現(xiàn)無(wú)蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū)，當(dāng)受到電擊時(shí)，這個(gè)區(qū)域就會(huì)被擊穿，產(chǎn)生脂雙層膜孔，導(dǎo)致細(xì)胞之間的細(xì)胞質(zhì)連通，進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞融合。電融合技術(shù)有許多優(yōu)點(diǎn)，如誘導(dǎo)細(xì)胞融合的頻率高，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害作用，操作簡(jiǎn)便，可重復(fù)性好。
 



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