此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。豬ELISA試劑盒很輕易泛起重復滴加或加在兩孔之間的現象，這樣就會在孔內的非包被區泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。豬ELISA試劑盒實驗基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

    用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發性方式開釋，因此，在測定此類激素時，有必要在緊密親密相連的時間距離內采取數份血樣本，以其中間值為測定值。因此在豬ELISA試劑盒測定中試劑的預備zui為樞紐的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。加血清樣本及反應試劑在現在的ELISA試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。